染色薄層色譜糖脂

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

染色薄層色譜可以非常敏感的檢測功能活性碳水化合物配體蛋白受體（1，2）。這些碳水化合物結(jié)構(gòu)檢測糖脂分子從復(fù)雜的混合物中提取出相關(guān)的靶組織。一些蛋白質(zhì)受體可能分析：抗體，嵌合免疫球蛋白蛋白，凝集素，選擇素，毒素，和其他碳水化合物結(jié)合蛋白。這種方法可以測定的數(shù)量，大小（值）和費用（結(jié)合離子色譜法）的碳水化合物配體（）。此外，這種方法在確定艾滋病方法用于純化的糖脂配體和隨后監(jiān)測凈化過程（3，4）。相反，糖蛋白，糖脂含有一個半抗原寡糖和分子因此，一旦純化和結(jié)構(gòu)特點，糖脂是功能活躍的碳水化合物序列的蛋白受體的研究。

材料：

層析槽

支持薄層硅膠板熒光指標(biāo)

玻璃微量注射器

培養(yǎng)皿（150毫米）

玻璃顯微鏡幻燈片

# 1過濾紙濾紙

加熱干燥機

噴涂裝置

塑料擠壓瓶

聚異丁基甲基丙烯酸甲酯

丙酮

氯仿

甲醇

氯化鉀

磷酸鹽緩沖液（0.01米磷酸鈉，氯化鈉的先鋒，PH值7.6）

牛血清白蛋白

苔黑酚

間苯二酚

二氨基聯(lián)苯胺鹽酸鹽（民建聯(lián)）

協(xié)議：

制備的色譜槽

1。添加150毫升氯仿/甲醇／0.25%氯化鉀（5時04分01秒）到一個玻璃層析槽（25厘米×27厘米×10厘米）內(nèi)襯過濾紙，蓋緊。

2。允許蒸汽坦克平衡至少2小時。的結(jié)果是，準(zhǔn)備一個新的坦克日報。

制備硅膠板

1。切板所需的大小用剪刀。*佳高度為10厘米。

2。畫一個非常輕鉛筆線1.5厘米的平行板的底部被不小心劃傷硅膠。

3。使用玻璃為糖脂，現(xiàn)場樣品沿5毫米路徑上的鉛筆線。這些不同的路徑（道）的2.5毫米。

4。待測樣品的糖含量的地衣酚噴霧應(yīng)放在一起一部分的薄層板分離的樣品染色。

層析硅膠板

1。使用一對長鉗，抓板頂部和在坦克與斑樣本只是以上級別的溶劑。允許頂部邊緣緊靠后的發(fā)展室。

2。掩護坦克緊密，使板保持原狀直到升溶劑線到達板的頂部（約30 - 45分鐘）。

3。將薄層板的頂部邊緣的抓鉗和允許板徹底干燥空氣下化學(xué)通風(fēng)櫥。

染色標(biāo)準(zhǔn)的碳水化合物

1。剪除部分的薄層板含有糖脂標(biāo)準(zhǔn)。

2。在化學(xué)煙罩，噴板簡述0.1%地衣酚溶解在5% H2SO 4。

3。立即放在一個加熱爐在120攝氏°大約5 - 10分鐘。

4。如果染色弱，步驟2和3可以重復(fù)。

制備的層析板染色

1。2µ我正（碳水化合物結(jié)合蛋白）和消極的（牛血清白蛋白）控制（0.5毫克/毫升）在底部的薄層板和允許完全干燥空氣。

2。浸漬薄層板為90秒，在一個玻璃培養(yǎng)皿（150毫米）含有0.1%的解決polyisobutylmethacrylate珠predissolved丙酮。的結(jié)果，板應(yīng)進入溶液迅速，長邊的，在45度角。

3。拆下板與直立根據(jù)化學(xué)煙罩完全風(fēng)干。

4。測量表面面積的薄層板。

5。噴霧薄層板與磷酸鹽緩沖液含1%牛血清白蛋白和大力淹沒立即在同一溶液中培養(yǎng)皿1小時。

染色的主要碳水化合物結(jié)合蛋白

1。稀碳水化合物結(jié)合蛋白（如抗體）10µ克/毫升含1%牛血清白蛋白在公共電視網(wǎng)。數(shù)額將覆蓋65µ升/平方厘米的薄層板的表面。

2。準(zhǔn)備一個底座略小于薄層板與玻璃顯微鏡幻燈片底部的一個培養(yǎng)皿。

3。將薄層板從pbs-1 %牛血清白蛋白，排水，和水平放置，硅膠的一面，上蓋的玻璃滑動底座。不要讓板干在任何步驟直到結(jié)束