為了刺激研究界實(shí)現(xiàn)更高標(biāo)準(zhǔn)的抗體重復(fù)性，抗體驗(yàn)證工作組（IWGAV）近日出臺(tái)了一套指南。這些指南發(fā)表在9月5日的《Nature Methods》雜志上，強(qiáng)調(diào)了抗體驗(yàn)證需要針對(duì)應(yīng)用和背景來(lái)開展。 這篇題為“A Proposal for Validation of Antibodies”的文章是由IWGAV的數(shù)名成員發(fā)表的，包括工作組主席、瑞典皇家理工學(xué)院的微生物學(xué)教授Mathias Uhlén。文章提出了五點(diǎn)，以指導(dǎo)特定應(yīng)用中的抗體驗(yàn)證。
• 遺傳策略：測(cè)定對(duì)照細(xì)胞或組織中的相關(guān)信號(hào)，這些對(duì)照中的目標(biāo)基因已利用CRISPR或RNAi等技術(shù)敲除或敲低。
• 正交策略：利用不依賴抗體的方法定量多個(gè)樣品，然后檢查依賴抗體和不依賴抗體這兩種定量之間的相關(guān)性。
• 獨(dú)立抗體策略：利用兩個(gè)或更多的獨(dú)立抗體來(lái)識(shí)別目標(biāo)蛋白上的不同表位，再通過比較和定量分析來(lái)確認(rèn)特異性。
• 表達(dá)標(biāo)記蛋白：修飾內(nèi)源的目標(biāo)基因，增加親和標(biāo)簽或熒光蛋白的序列。標(biāo)記蛋白的信號(hào)可與基于抗體的檢測(cè)相關(guān)聯(lián)。
• 免疫捕獲加上質(zhì)譜分析：將免疫捕獲與MS分析相結(jié)合，以確定與純化的抗體直接作用的蛋白質(zhì)，以及可能與目標(biāo)蛋白形成復(fù)合物的蛋白質(zhì)。
這篇文章還對(duì)生產(chǎn)商和使用者提出建議，以確保長(zhǎng)期的抗體重復(fù)性。作者們建議使用者在自己特定的應(yīng)用或樣品中，至少運(yùn)用上面的一種策略來(lái)開展驗(yàn)證。同時(shí)，他們還建議使用者按照一定的形式報(bào)告，包含貨號(hào)、批號(hào)和RRID（研究資源標(biāo)識(shí)符），以確保研究中使用的任何抗體可被明確識(shí)別。
同時(shí)，作者們也向生產(chǎn)商提出了類似的建議，至少運(yùn)用一種策略來(lái)驗(yàn)證，并提供盡可能多的抗體信息，如鑒定檢測(cè)中的抗體濃度、細(xì)胞提取物的濃度、抗體生產(chǎn)所用的免疫原、抗體-表位的親和力、緩沖液配方等。
“這篇文章邁出了重要的步，有望制定出廣泛接受的抗體驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)，確保生命醫(yī)學(xué)研究使用高質(zhì)量且一致的抗體，”Uhlén博士表示。“我們期待抗體用戶、出版商、資助機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)商的反饋，以幫助加強(qiáng)這個(gè)初步建議，并確保這些基本工具的可靠性。”
在文章發(fā)布之后，抗體生產(chǎn)商 – 賽默飛世爾公司承諾，它將按照IWGAV的建議來(lái)驗(yàn)證其抗體的特異性。賽默飛表示，它將很好地遵循這個(gè)指南，并借助其的質(zhì)譜、CRISPR和siRNA平臺(tái)來(lái)開展驗(yàn)證。此外，對(duì)于通過新標(biāo)準(zhǔn)的抗體，公司會(huì)在網(wǎng)站上標(biāo)注，以表示它通過特異性檢測(cè)。
賽默飛世爾的生命科學(xué)部門總裁Peter Silvester表示：“賽默飛世爾很高興看到抗體驗(yàn)證工作組的個(gè)建議。我們相信，這些標(biāo)準(zhǔn)將有助于對(duì)抗用戶在使用這些關(guān)鍵工具時(shí)面臨的挑戰(zhàn)。我們承諾按照IWGAV的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)測(cè)試我們的抗體，這證明了我們對(duì)科學(xué)的承諾，以及我們提供特異抗體的使命。”
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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